蘇丹紅：人工合成的系列偶氮類(lèi)工業(yè)染料，分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ號(hào)。國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)將蘇丹紅Ⅳ號(hào)列為三類(lèi)致癌物，其初級(jí)代謝產(chǎn)物鄰氨基偶氮甲苯和鄰甲基苯胺均列為二類(lèi)致癌物，均有一定的潛在致癌作用。

近年來(lái)歐盟和我國(guó)都嚴(yán)禁使用蘇丹紅作為食品添加劑，參考國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 19681-2005《食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)方法 高效液相色譜法》，我們采用反相高效液相色譜儀對(duì)蘇丹紅I號(hào)、II號(hào)和IV號(hào)進(jìn)行了測(cè)定。

1、 方法原理    

樣品經(jīng)溶劑提取、固相萃取凈化后，用反相高效液相色譜—紫外可見(jiàn)光檢測(cè)器進(jìn)行色譜分析，采用外標(biāo)法定量。 

2、 主要儀器和試劑

1）【上分】牌高效液相色譜儀，二元高壓梯度；

2）電子天平；

3）超聲波水??；

4）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，5）離心機(jī)，6）蘇丹紅檢測(cè)專(zhuān)用固相萃取柱；

6）蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱(chēng)取適量蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用乙腈配制成10 µg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液待用。 

3、 實(shí)驗(yàn)方法

3.1樣品制備

3.1.1樣品提取準(zhǔn)確稱(chēng)取咸鴨蛋黃1.0g于三角瓶中，加入10mL正己烷，渦旋1min后振蕩5min，超聲5min，4000r/min離心5min，收集上清液。下層殘留物用10mL正己烷按上述步驟重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至近干，再加入5 mL正己烷混勻，待用。

3.1.2 SPE柱凈化：

1）活化：蘇丹紅檢測(cè)柱使用前用10 mL正己烷活化；

2）上樣和洗脫：蘇丹紅檢測(cè)柱上加入待凈化液，棄去流出液；依次加入5 mL正己烷、5 mL 1%乙酸乙酯正己烷淋洗，棄去淋洗液；再加入10 mL 30%乙酸乙酯-正己烷溶液，收集洗脫液。（整個(gè)上樣洗脫過(guò)程均保持流速1 mL/min)

3）洗脫液在40 ℃下減壓蒸餾近干，加1mL 40%甲基叔丁基醚甲醇溶液定容，過(guò)0.45μm 濾膜后供HPLC分析。

 

3.2、高效液相色譜儀參考條件

色譜柱：C18 4.6 mm(i.d)×250mm，5μm；

梯度程序：流動(dòng)相A: 乙腈       流動(dòng)相B: 0.2%磷酸水溶液

流速：1 mL/min；

柱溫：40℃波長(zhǎng)：518 nm；

進(jìn)樣體積:  20 μL

測(cè)定：取相同體積試樣制備液和標(biāo)準(zhǔn)使用液分別注入高效液相色譜儀，根據(jù)保留時(shí)間按定性，外標(biāo)峰面積法定量。

 4、  實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1  高效液相色譜圖

2.5 μg/mL 蘇丹紅I、蘇丹紅II、蘇丹紅IV混合標(biāo)準(zhǔn)樣品

 

1、蘇丹紅I     2、蘇丹紅II      3、蘇丹紅IV

4.2工作曲線(xiàn)的繪制

蘇丹紅I號(hào)工作曲線(xiàn)見(jiàn)下圖，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)：0.9997



 

5、  小結(jié)

實(shí)驗(yàn)中前處理步驟選用專(zhuān)用的蘇丹紅萃取小柱，去油效果佳，能有效去除油酯等干擾，有較高的回收率和穩(wěn)定性；采用二元高壓梯度，三種蘇丹紅組分有很好的分離效果和重復(fù)性。此方法也適用于其他食品基質(zhì)中蘇丹紅的檢測(cè)。